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詳解細(xì)胞毒性檢測(cè)方法及影響實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵因素

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項(xiàng)目詳情
  MTT法又稱MTT比色法是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的方法。其檢測(cè)原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚(Formazan)并沉積在細(xì)胞中,而死細(xì)胞無(wú)此功能。
 
  在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi),MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測(cè)、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及腫瘤放射敏感性測(cè)定等。它的特點(diǎn)是靈敏度高、經(jīng)濟(jì)。
 
  影響實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵因素:
 
  細(xì)胞消化。若消化出現(xiàn)問(wèn)題,則會(huì)影響細(xì)胞的活性,進(jìn)而影響OD值。對(duì)于 MDA-MB-231、MCF-7、HS-578T 等一系列容易消化的細(xì)胞,消化時(shí)胰蛋白酶中不添加EDTA,消化時(shí)也僅需胰酶浸潤(rùn)數(shù)秒即可。然而,對(duì)于SW480等一系列難以消化的細(xì)胞,胰蛋白酶中需添加濃度為0.25%的EDTA; 接種數(shù)量。對(duì)于細(xì)胞接種數(shù)量要適宜,過(guò)小或過(guò)大均會(huì)影響OD值(過(guò)小細(xì)胞容易死亡,過(guò)大細(xì)胞容易生長(zhǎng)擁擠)。
 
  結(jié)晶物的溶解。加入DMSO,放入37℃孵箱內(nèi)孵育10~20 min,有助于DMSO對(duì)紫色結(jié)晶物的溶解。培養(yǎng)液的棄去。或用移液器吸取孔內(nèi)培養(yǎng)液,吸取的時(shí)候要注意移液頭要緊貼孔內(nèi)側(cè)壁吸取,不要觸碰底部的紫色結(jié)晶。或?qū)?6孔板倒扣于濾紙上來(lái)吸取孔內(nèi)的培養(yǎng)液。
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